检测技术服务:蛋白纯化pull-down--检测技术服务详情
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GST pull-down实验的基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,然后目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的较纯的目的蛋白。
谷胱甘肽S转移酶(GST)是一个含有211个氨基酸的蛋白,通常将该蛋白加入到重组蛋白的N-末端以便对该重组蛋白进行纯化或检测。由于GST对于其底物-谷胱甘肽具有极高的特异性,所以可以获得更高的纯度。
通过GST与Pull-down技术相结合(即GST pull-down技术)可作为体外检测蛋白质相互作用的一种方法,可以验证已知蛋白的互作,也可以筛选并纯化与已知蛋白互作的未知蛋白。GST能特异的与谷胱甘肽结合表现为酶和底物的作用原理,利用这个原理将GST做成标签表达出融合蛋白,与带谷胱甘肽配基的亲和介质特异性结合,从而纯化出目标蛋白。GST融合蛋白纯化的特点有纯度高、纯化条件温和保持蛋白活性、促进蛋白可溶性表达等。
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百泰派克生物科技-生物药物表征,生物质谱多组学优质服务商
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