影响电泳实验泳动速度的重要因素——支持物
电泳实验多在固体支持物上进行,使样品中的不同组分形成不同的区带,称区带电泳。电泳结束后,小型蛋白电泳槽价格,支持物可以方便地进行染色等后续处理。
对支持物的一般要求是均匀,吸附力和电渗小,机械性能好,便于染色或紫外光下检测。常用支持物有SDS——PAGE凝胶,琼脂糖凝胶、滤纸,山东小型蛋白电泳槽,醋酸纤维素薄膜等 , 支持物性质不同也会影响泳动速率,如琼脂糖和聚酰胺凝胶都有大小不同的筛孔,小型蛋白电泳槽厂商,在筛孔大的凝胶中溶质颗粒的泳动速率快,反之则慢。
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琼脂糖水平电泳槽
琼脂糖水平电泳槽实验操作
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1. 根据电泳需要,配置合适浓度的电泳及制胶缓冲液。一般为 1× TAE或0.5×TBE。
注意:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。
2. 根据制胶量及凝胶浓度,在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中,加入准确称量的琼脂糖粉。
注意:总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。
3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖
注意:必须保证琼脂糖充分完全溶解,否则,会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡,停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。
4.使溶液冷却至60℃左右,如需要可在此时加入EB溶液使其终浓度为0.5ug/ml,并充分混匀(EB为危险品,不提倡使用)。注意:EB是一种致癌物质。使用含有EB的溶液时,请戴用手套。EB在可见光下会分解。
5.将琼脂糖溶液倒入制胶托盘中,小型蛋白电泳槽厂家,然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在5-8 mm 之间。
注意:不要产生气泡,溶液温度太高(gt;60℃),会使得水分
过分蒸发,改变凝胶离子浓度,影响电泳效果。
6.在室温下使胶凝固(大约30 分钟),然后放置于电泳槽中进行电泳。
注意:凝胶不立即使用时,用保鲜膜将凝胶包好在4℃下保存,或者放在制胶的缓冲液中,一般可保存2~5 天。
转印电泳的分类及注意事项:
Western Blotting(蛋白质单项电泳后印迹转移)
Eastern Blotting(蛋白质双向电泳后印迹转移)
Southern Blotting(DNA印迹) Northern Blotting(RNA印迹)
在转印过程中要控制温度 ,在低温或者冷循环条件下进行
对于分子量大于100KD的蛋白质大分子不用半干转
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